小鼠凝血因子Ⅸ（FⅨ）ELISA试剂盒
Mouse Fcoagulation factor Ⅸ,FⅨ ELISA Kit
包装：96T/48T
检测标本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
保存：2-8℃，一年。
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供应商：
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相关知识>>>>>>>
试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
800 pg/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
400 pg/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
200 pg/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
100 pg/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 pg/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 pg/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 pg/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。
2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
液体类标本：
标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血浆。每个标本量收集体积＝ 100ul × 检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。
血清：
室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ，缓冲液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀 浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型
塑料膜板盖 1块 半块 即用型
标准品：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀
空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素标记的抗IFN-γ抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按说明书进行稀释
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型
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